石斛的继代培养实验报告

① 石斛组织培养是什么

你好，石斛属于花卉的一种。
组织培养就是利用生物技术来培养石斛细胞
使之实现快速的繁殖
对身体没有什么损害
属于重复性工作

② 继代培养是什么意思原代培养与传代培养都是继代培养，是吗生物

继代培养是指愈伤组织在培养基上生长一段时间后，营养物枯竭，水分散失，并已经积累了一些代谢产物，此时需要将这些组织转移到新的培养基上，这种转移称为继代培养。也可以称为传代培养。而原代培养的定意是：直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。因此，较为严格地说是指成功传代之前的培养。通俗说就是第一次培养。综上而说：继代培养也是传代培养。是与原代培养不同的。LZ明白了吗？希望我的回答对你有帮助。＿手打禁抄

③ 石斛组织培养主要流程有哪几步

选择生长健壮的3～6厘米长的新芽作外植体。用消了毒的利刀将新芽从母体切下，经自来水冲洗30分钟后，剥去最外面一层叶鞘，在75%的酒精中迅速蘸一下，立即放入15%次氯酸钠溶液中浸泡15分钟，或放入0.1%的升汞溶液中8～10分钟，并不时用手轻摇。取出后再剥去多余的组织，再放入5%次氯酸钠溶液中浸泡5～10分钟，取出后用无菌水冲洗数次，然后在无菌条件下剥去叶苞片，以顶芽或侧芽作为外植体接种于试管中。

将顶芽接种于KC加1毫克/升NAA的固体培养基或KC液体培养基中，而将侧芽接种于KC固体培养基中培养，控制室温26℃、光照2000勒克斯、每天光照16～24小时。液体培养基每两周要更换1次。所产生的原球茎繁殖很快，达到一定数量时应及时转入VW+（15%～50%）椰乳+（10%～20%）香蕉汁+（10%～20%）马铃薯提取液，或MS+（10%～20%）香蕉浆，或KC+（10%～20%）香蕉汁的分化培养基上，于室温20～25℃、光照2000勒克斯、日照明16～24小时的条件下促进原球茎萌发成苗。对那些只长芽、不长根的个体，可将其转入生根培养基中培养，并在生根培养基中添加少量植物生长素，如0.1毫克/升NAA等。

④ 继代培养 初代培养 生根培养三种培养基的相同点

即使同种植物,想知道诱导愈伤与继待培养基区别,终效同般同,同植物组培初代继代激素都,所加,网查找相关资料

⑤ 铁皮石斛怎么培养

铁皮石斛不仅作为珍稀药材而得到大规模的人工种植,而且还被开发成盆景,在家里也能进行栽种;长成的铁皮石斛不仅可以用作观赏、净化空气之用，还可以自产自食。但是，由于生长环境的苛刻要求，在家里养铁皮石斛也有很多讲究。那么，铁皮石斛在家里要怎么养呢？

铁皮石斛的生长规律

通常盆栽的铁皮石斛会在3月底4月初新芽萌发，5到6月老茎上会开出一些花，进入到冬季叶子会陆续出现变黄和掉落现象。而且铁皮石斛最大特点是：喜阳但怕晒，喜湿但怕涝；属气生根植物，生长环境透气性要好。

养护要点

第一，一定要选择一个遮光的地方。
因为石斛这种植物不喜欢阳光充足的地方，喜欢半阴的地方。如果在春天夏天阳光充足时要让它遮光百分之六十到百分之七十左右；如果在冬季的话，也是需要一些阳光的，这时候可以让它遮光百分之二十到百分之三十之间，或者不让他遮光也可以。

第二，还要注意一下保温。
这一植物喜欢阴凉高湿的环境，夜间温度在十摄氏度左右或者更低一些，一般情况在十到十五摄氏度左右就可以了，如果温差小的话会影响它的生长的，最后也会影响他开花的效果。

第三，在培养时一定要适当地喷水。
这样做的目的就是为了增加空气的湿度。铁皮石斛喜欢水分多一些的环境，但是这个度一定要把握好，如果温度过高的话也会影响生长的，而且湿度太大会出现烂根的现象，所以一定要适度的喷水。

第四，要注意合理施肥
一般情况是七天到十天施一次肥就行了，如果在休眠的时候也可以不要施肥。

第五，要注意防治病虫害
盆栽铁皮石斛应及时清理病叶，并建议人工杀虫，杜绝农药的使用，使铁皮石斛茁壮成长，同时做好通风工作，减少病虫害出现的机率和次数。

第六，最后就来说说浇水的讲究
给铁皮石斛浇水一定要一次性浇足、浇透。而且季节和天气都是主要的影响因素。

【春季】通常在基质表面干燥时再浇水，晴天早晚各浇水一次，浇水时间适宜选在上午10～12时之间，气温升至25℃左右，水温15 ℃以上为宜。

【夏季】晴天每天早晚各浇水一次，阴天雨天，根据基质的湿度适当补水或不浇水。夏天气温较高，浇水时间适宜选在清晨或傍晚。

【秋季】晴天间隔1天或2～3天浇一次水，阴雨天根据基质的湿度进行补水或不浇水。浇水时间适宜选在上午10～12时之间，气温升至25℃左右，水温15 ℃以上为宜。

【冬季】2～3天浇一次水，浇水一定要一次性浇足、浇透。冬季气温较低，基质水分宜干不宜湿，因此浇水不宜多。

铁皮石斛种植方法

这次团购植料和石斛苗。

花粉“最美丽的雪人”供图

种植方法：第一步放少量石块增加重量。

种植方法：第二步粗木块装满盆子三分之二。

种植方法：第三步放细料种植。

种植方法：第四步放有机肥。

一盆石斛就这么种好啦。
除了上述方法，我们也可以用松鳞片种植，将松鳞片放水中浸泡一段时间（团长上次是浸泡一夜），然后直接将松鳞片放入盆中种植，根部不要埋太深，能遮住就行了。种下后每天早晚各浇水一次，或者用浸盆法浇水。

如果实在找不到松鳞片，花粉推荐的虹越国兰种植土，也是一个不错的选择。
园土、营养土、椰砖之类真的不适合哦！透气很重要！切记！

⑥ 继代培养的概述

对来自于外植体所增殖的培养物(包括细胞、组织或其切段)通过更换新鲜培养基及不断切割或分离，进行连续多代的培养，就称为继代培养

⑦ 初代培养，继代培养，生根培养的异同点

(1)初代培养也称诱导培养。培养基由于植物种类的不同而不同，通常是MS基本培养基加入适量的植物生长调节剂及其他成分。首先在一-定温度(22~ 28C)下进行暗培养,待长出愈伤组织后转入光培养。此阶段主要诱导芽体解除休眠，恢复生长。

(2)继代培养也称增殖培养。 将见光变绿的芽体组织从诱导培养基转接到芽丛培养基上,在每天光照12~ 16h,光照强度1000~ 3000lx条件下培养,不久即产生绿色丛生芽。将芽丛切割分离.进行继代培养，扩大繁殖.平均每月增殖一代.每代增殖5~10倍。为了防止变异或突变,通常只继代培养10~12次。根据需要，一部分进行生根培养,一部分仍继代培养。

(3)生根培养培养基通常 为1/2MS培养基加人适量的植物生长调节剂，如1/2MS+NAA(或IBA)0. lmg/L.切取增殖培养瓶中的无根苗,接种到生根培养基上进行诱根培养。有些易生根的植物在继代培养中通常会产生不定根.可以直接将生根苗移出进行驯化培养。或者将未生根的试管苗长到3~ 4cm长时切下来,直接栽到蛭石为基质苗床中进行瓶外生根，效果也非常好,省时省工,降低成本。这个阶段可筛选淘汰生长不良和感病的试管苗。

⑧ 细胞培养的实验报告

实验：细胞培养

1.实验目的

初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程，为生物工程在医学上的应用打下基础。

2.实验原理

从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充，可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，耗费少，比较经济，因此成为生物学研究的重要手段。近年来，在体细胞遗传、分化、胚胎发生、肿瘤发生、免疫学、细胞工程、放射生物学以及老年学等一系列的研究领域中得到广泛的应用，并取得了丰硕的成果。

细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。

细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、pH值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。

3.实验用品

3.1 材料和标本 乳兔、HeLa细胞(人宫颈癌细胞)

3.2 器材和仪器 手术器械、平皿、培养瓶、吸管、离心管(灭菌后备用)、酒精灯、烧杯、超净工作台、二氧化碳培养箱、倒置显微镜。

2.3 试剂 含有5％小牛血清的MEM培养液、0.01mol／L PBS，0.25％胰蛋白酶一0.02％EDTA混合消化液、75％乙醇。

4.实验方法

4.1 原代细胞培养

4.1.1 原理

细胞培养(Cell culture)是模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。近年来，广泛地应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域，发展成一种重要生物技术，并取得显著成就。由体内直接取出组织或细胞进行培养叫原代培养。原代培养细胞离体时间短，性状与体内相似，适用于研究。一般说来，幼稚状态的组织和细胞，如：动物的胚胎、幼仔的脏器等更容易进行原代培养。

4.1.2 操作

①．取材

用颈椎脱位法使乳兔迅速死亡。然后，把整个动物浸入盛有75％乙醇的烧杯中数秒钟消毒，取出后放在大平皿中携入超净台。用消过毒的剪刀剪开用碘酒和乙醇再次消毒后的皮肤，剖腹取出肝脏或肾脏。置于无菌平皿中。

②．切割

用灭菌的PBS液将取出的脏器清洗三次，然后用眼科手术剪刀仔细将组织反复剪碎，直到成1mm3左右的小块，再用PBS清洗，洗到组织块发白为止。移入无菌离心管中，静置数分钟，使组织块自然沉淀到管底，弃去上清。

③．消化、接种培养

吸取0.25％胰蛋白酶一0.02％EDTA混合消化液1ml，加入离心管中，与组织块混匀后，加上管口塞子，37℃水浴中消化8～10分钟，每隔几分钟摇动一下试管，使组织与消化液充分接触，静止，吸去上清，向离心管中加入5～10ml含5％小牛血清的MEM培养基，用吸管吹打混匀，移入二个培养瓶中，置于二氧化碳培养箱中培养。

4.1.3 结果

细胞接种后一般几小时内就能贴壁，并开始生长，如接种的细胞密度适宜，5天到一周即可形成单层。

4.2 传代细胞培养

4.2.1 原理

体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代，以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞，并维持细胞种的延续。培养的细胞形成单层汇合以后，由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭，将培养的细胞分散，从容器中取出，以1:2或l:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养，即为传代培养。

细胞“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间，与细胞世代或倍增不同。在一代中，细胞培增3～6次。细胞传代后，一般经过三个阶段：游离期、指数增生期和停止期。

常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度，即细胞群的分裂相数／100个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2％～0.5％，肿瘤细胞可达3～5％。细胞接种2～3天分裂增殖旺盛，是活力最好时期，称指数增生期(对数生长期)，适宜进行各种试验。

4.2.2 操作

①．将长成单层的原代培养细胞或HeLa细胞从二氧化碳培养箱中取出，在超净工作台中倒掉瓶内的培养液，加入少许消化液。(以液面盖住细胞为宜)，静置5～10分钟。

②.在倒置镜下观察被消化的细胞，如果细胞变园，相互之间不再连接成片，这时应立即

在超净台中将消化液倒掉，加入3～5ml新鲜培养液，吹打，制成细胞悬液。

③．将细胞悬液吸出2ml左右，加到另一个培养瓶中并向每个瓶中分别加3ml左右培养液，盖好瓶塞，送回二氧化碳培养箱中，继续进行培养。

4.2.3 结果

一般情况，传代后的细胞在2小时左右就能附着在培养瓶壁上，2～4天就可在瓶内形成单层，需要再次进行传代。

4.3 器材及液体的准备和无菌操作的注意事项

4.3.1 器材和液体的准备

细胞培养用的玻璃器材，如：培养瓶、吸管等在清洗干净以后，装在铝盒和铁筒中，120℃，2小时干烤灭菌后备用；手术器材、瓶塞、配制好的PBS液用灭菌锅15磅，20分钟蒸气灭菌；MEM培养液、小牛血清、消化液用G6滤器负压抽滤后备用。

4.3.2 无菌操作中的注意事项

在无菌操作中，一定要保持工作区的无菌清洁。为此，在操作前要认真地洗手并用75％乙醇消毒。操作前20～30分钟起动超净台吹风。操作时，严禁说话，严禁用手直接拿无菌的物品，如瓶塞等，而要用器械，如止血钳、镊子等去拿。培养瓶要在超净台内才能打开瓶塞，打开之前用乙醇将瓶口消毒，打开后和加塞前瓶口都要在酒精灯上烧一下，打开瓶口后的操作全部都要在超净台内完成。操作完毕后，加上瓶塞，才能拿到超净台外。使用的吸管在从消毒的铁筒中取出后要手拿末端，将尖端在火上烧一下，戴上胶皮乳头，然后再去吸取液体。总之，在整个无菌操作过程中都应该在酒精灯的周围进行。

5．实验报告

(1).原代细胞和传代细胞培养有哪些区别?

(2).总结一下你自己的经验，怎样才能既迅速，又保证无菌操作。

⑨ 关于继代培养的一些知识。

将培养细胞从培养器中取出，把一部分移至新的培养器中再进行培养，这种培养方式称为传代培养，亦称为继代培养或连续培养。 当原代培养成功以后，随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一则细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度减慢甚至停止；另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。此时就需要将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿（瓶）内，再进行培养。这个过程就称为传代（passage）或者再培养（subculture）。对单层培养而言，80%汇合或刚汇合的细胞是较理想的传代阶段。

⑩ 石斛兰怎么进行组织培养繁殖

主要用茎尖培养选取健壮充实的新芽，在无菌条件下剥取顶芽为外植体，进行液体振荡培养，当外植体产生的原球茎有一定数量后即可转移到固体培养基上培养