❶ 请问如何用sevage法(即用氯仿-正丁醇5:1)除掉多糖中的蛋白
我查的资料都是4:1的,具体方法:在多糖溶液中加入体积4:1的氯仿-正丁醇混合溶液进行充分振摇,将游离蛋白质变性成为不溶性物质而沉淀,经离心或分液去除蛋白质,此方法条件温和,但需要反复多次才能除去尽可能多的蛋白质
❷ servage去除蛋白质原理 为什么正丁醇和氯仿的比率为1:4或1;5,还有这个实验的原理.
savage法提取多糖:
根据蛋白质在氯仿等有机溶剂变性而不溶与水的特点,将多糖水溶液、氯仿、戊醇(或正丁醇)之比调为25:5:1或25:4:1,混合物剧烈振摇20到30分钟,蛋白质与氯仿-戊醇(或正丁醇)生成凝胶物而分离,然后离心,分去水层和溶剂层交界处的变性蛋白质.
此种方法较温和,在避免降解上有较好效果,但效率不高,如五味子多糖的提取实验中要重复处理达三十几次.并且每次除去蛋白质变性胶状物时,不可避免的溶有少量多糖,另外少量多糖与蛋白质结合的蛋白聚糖和糖蛋白,在处理时会沉淀下来,造成多糖的损失.如能配合加入一些蛋白质水解酶,再用Sevage法效果更佳.
❸ Sevag试剂怎么除蛋白
常用的去除多糖中蛋白质的方法有:Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯醋酸法,这些方法的原理是使多糖不沉淀而使蛋白质沉淀,其中Sevag方法脱蛋白效果较好,它是用氯仿:戊醇或丁醇,以4:1比例混合,加到样品中振摇,使样品中的蛋白质变性成不溶状态,用离心法除去。
❹ sevage法脱蛋白的具体步骤
正丁醇、氯仿混合溶液(正丁醇:氯仿=1:4或1:5)和样物提取液混合并且振荡,不需要加热
利用离心机离心,直到离液面交界处无白色混悬,也就是蛋白质介于提取液与试剂交界处即可~
最后分别提取即可
❺ sevag法脱蛋白,具体的什么方法
常用的去除多糖中蛋白质的方法有:Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯醋酸法,这些方法的原理是使多糖不沉淀而使蛋白质沉淀,其中Sevag方法脱蛋白效果较好,它是用氯仿:戊醇或丁醇,以4:1比例混合,加到样品中振摇,使样品中的蛋白质变性成不溶状态,用离心法除去。
Sevage 法:利用蛋白质在三氯乙烷等有机溶剂中变性的特点,将提取液与 Sevage试剂[氯仿:正丁醇=5:1(V/V)]5:1 混合,振荡,离心,变性后的蛋白质介于提取液与 Sevage 试剂交界处。此法的优点是条件温和,不会引起多糖的变性。
三氯醋酸法 于样品液中加入适量的三氯醋酸,混匀后静置过夜,离心过滤弃去滤渣,收集滤液,测定糖浓度和蛋白质浓度"
❻ 提纯多糖时用Sevage法除蛋白的具体方法急!!!
.....................自己以后要多看资料,这是自己判断的事情。
这个比例其实都行,没有绝对的对错。你就选择1:4 震荡时间自己决定,应为如果你要拖干净的话,也可以多次每次时间短啊,这个和时间长次数少效果是一样的。 离心好!并且告诉你样品稍微多准备点,如果你的样品蛋白质含量高,你去蛋白次数过多的话,你的样品会在反复的转移中损失很大。
顺便带上手套,口罩,这个东西是蛋白质变性,弄到你手上最多吊点皮(如果你不在乎) 气味很刺激。化学实验都是和毒品打交道,尽量注意安全卫生。
❼ sevage法除蛋白需要的试剂仪器和步骤
Sevage 法:利用蛋白质在三氯乙烷等有机溶剂中变性的特点,将提取液与 Sevage试剂[氯仿:正丁醇=5:1(V/V)]5:1 混合,振荡,离心,变性后的蛋白质介于提取液与 Sevage 试剂交界处。此法的优点是条件温和,不会引起多糖的变性。
仪器主要就是离心管、离心机之类的了,试剂就氯仿、正丁醇。
❽ sevag法具体是什么样的啊
加入0.2倍多糖溶液体积的氯仿和0.04倍体积的正丁醇混合振荡半小时进行分离,直至氯仿与水的界面无沉淀为止,且要重复处理2-3次才能有效除去多糖中的蛋白质。
一般都有市售的试剂盒,也不贵,效果比自己配试剂强很多