石斛的繼代培養實驗報告

① 石斛組織培養是什麼

你好，石斛屬於花卉的一種。
組織培養就是利用生物技術來培養石斛細胞
使之實現快速的繁殖
對身體沒有什麼損害
屬於重復性工作

② 繼代培養是什麼意思原代培養與傳代培養都是繼代培養，是嗎生物

繼代培養是指愈傷組織在培養基上生長一段時間後，營養物枯竭，水分散失，並已經積累了一些代謝產物，此時需要將這些組織轉移到新的培養基上，這種轉移稱為繼代培養。也可以稱為傳代培養。而原代培養的定意是：直接從機體取下細胞、組織和器官後立即進行培養。因此，較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養。通俗說就是第一次培養。綜上而說：繼代培養也是傳代培養。是與原代培養不同的。LZ明白了嗎？希望我的回答對你有幫助。＿手打禁抄

③ 石斛組織培養主要流程有哪幾步

選擇生長健壯的3～6厘米長的新芽作外植體。用消了毒的利刀將新芽從母體切下，經自來水沖洗30分鍾後，剝去最外面一層葉鞘，在75%的酒精中迅速蘸一下，立即放入15%次氯酸鈉溶液中浸泡15分鍾，或放入0.1%的升汞溶液中8～10分鍾，並不時用手輕搖。取出後再剝去多餘的組織，再放入5%次氯酸鈉溶液中浸泡5～10分鍾，取出後用無菌水沖洗數次，然後在無菌條件下剝去葉苞片，以頂芽或側芽作為外植體接種於試管中。

將頂芽接種於KC加1毫克/升NAA的固體培養基或KC液體培養基中，而將側芽接種於KC固體培養基中培養，控制室溫26℃、光照2000勒克斯、每天光照16～24小時。液體培養基每兩周要更換1次。所產生的原球莖繁殖很快，達到一定數量時應及時轉入VW+（15%～50%）椰乳+（10%～20%）香蕉汁+（10%～20%）馬鈴薯提取液，或MS+（10%～20%）香蕉漿，或KC+（10%～20%）香蕉汁的分化培養基上，於室溫20～25℃、光照2000勒克斯、日照明16～24小時的條件下促進原球莖萌發成苗。對那些只長芽、不長根的個體，可將其轉入生根培養基中培養，並在生根培養基中添加少量植物生長素，如0.1毫克/升NAA等。

④ 繼代培養 初代培養 生根培養三種培養基的相同點

即使同種植物,想知道誘導愈傷與繼待培養基區別,終效同般同,同植物組培初代繼代激素都,所加,網查找相關資料

⑤ 鐵皮石斛怎麼培養

鐵皮石斛不僅作為珍稀葯材而得到大規模的人工種植,而且還被開發成盆景,在家裡也能進行栽種;長成的鐵皮石斛不僅可以用作觀賞、凈化空氣之用，還可以自產自食。但是，由於生長環境的苛刻要求，在家裡養鐵皮石斛也有很多講究。那麼，鐵皮石斛在家裡要怎麼養呢？

鐵皮石斛的生長規律

通常盆栽的鐵皮石斛會在3月底4月初新芽萌發，5到6月老莖上會開出一些花，進入到冬季葉子會陸續出現變黃和掉落現象。而且鐵皮石斛最大特點是：喜陽但怕曬，喜濕但怕澇；屬氣生根植物，生長環境透氣性要好。

養護要點

第一，一定要選擇一個遮光的地方。
因為石斛這種植物不喜歡陽光充足的地方，喜歡半陰的地方。如果在春天夏天陽光充足時要讓它遮光百分之六十到百分之七十左右；如果在冬季的話，也是需要一些陽光的，這時候可以讓它遮光百分之二十到百分之三十之間，或者不讓他遮光也可以。

第二，還要注意一下保溫。
這一植物喜歡陰涼高濕的環境，夜間溫度在十攝氏度左右或者更低一些，一般情況在十到十五攝氏度左右就可以了，如果溫差小的話會影響它的生長的，最後也會影響他開花的效果。

第三，在培養時一定要適當地噴水。
這樣做的目的就是為了增加空氣的濕度。鐵皮石斛喜歡水分多一些的環境，但是這個度一定要把握好，如果溫度過高的話也會影響生長的，而且濕度太大會出現爛根的現象，所以一定要適度的噴水。

第四，要注意合理施肥
一般情況是七天到十天施一次肥就行了，如果在休眠的時候也可以不要施肥。

第五，要注意防治病蟲害
盆栽鐵皮石斛應及時清理病葉，並建議人工殺蟲，杜絕農葯的使用，使鐵皮石斛茁壯成長，同時做好通風工作，減少病蟲害出現的機率和次數。

第六，最後就來說說澆水的講究
給鐵皮石斛澆水一定要一次性澆足、澆透。而且季節和天氣都是主要的影響因素。

【春季】通常在基質表面乾燥時再澆水，晴天早晚各澆水一次，澆水時間適宜選在上午10～12時之間，氣溫升至25℃左右，水溫15 ℃以上為宜。

【夏季】晴天每天早晚各澆水一次，陰天雨天，根據基質的濕度適當補水或不澆水。夏天氣溫較高，澆水時間適宜選在清晨或傍晚。

【秋季】晴天間隔1天或2～3天澆一次水，陰雨天根據基質的濕度進行補水或不澆水。澆水時間適宜選在上午10～12時之間，氣溫升至25℃左右，水溫15 ℃以上為宜。

【冬季】2～3天澆一次水，澆水一定要一次性澆足、澆透。冬季氣溫較低，基質水分宜干不宜濕，因此澆水不宜多。

鐵皮石斛種植方法

這次團購植料和石斛苗。

花粉「最美麗的雪人」供圖

種植方法：第一步放少量石塊增加重量。

種植方法：第二步粗木塊裝滿盆子三分之二。

種植方法：第三步放細料種植。

種植方法：第四步放有機肥。

一盆石斛就這么種好啦。
除了上述方法，我們也可以用松鱗片種植，將松鱗片放水中浸泡一段時間（團長上次是浸泡一夜），然後直接將松鱗片放入盆中種植，根部不要埋太深，能遮住就行了。種下後每天早晚各澆水一次，或者用浸盆法澆水。

如果實在找不到松鱗片，花粉推薦的虹越國蘭種植土，也是一個不錯的選擇。
園土、營養土、椰磚之類真的不適合哦！透氣很重要！切記！

⑥ 繼代培養的概述

對來自於外植體所增殖的培養物(包括細胞、組織或其切段)通過更換新鮮培養基及不斷切割或分離，進行連續多代的培養，就稱為繼代培養

⑦ 初代培養，繼代培養，生根培養的異同點

(1)初代培養也稱誘導培養。培養基由於植物種類的不同而不同，通常是MS基本培養基加入適量的植物生長調節劑及其他成分。首先在一-定溫度(22~ 28C)下進行暗培養,待長出愈傷組織後轉入光培養。此階段主要誘導芽體解除休眠，恢復生長。

(2)繼代培養也稱增殖培養。 將見光變綠的芽體組織從誘導培養基轉接到芽叢培養基上,在每天光照12~ 16h,光照強度1000~ 3000lx條件下培養,不久即產生綠色叢生芽。將芽叢切割分離.進行繼代培養，擴大繁殖.平均每月增殖一代.每代增殖5~10倍。為了防止變異或突變,通常只繼代培養10~12次。根據需要，一部分進行生根培養,一部分仍繼代培養。

(3)生根培養培養基通常 為1/2MS培養基加人適量的植物生長調節劑，如1/2MS+NAA(或IBA)0. lmg/L.切取增殖培養瓶中的無根苗,接種到生根培養基上進行誘根培養。有些易生根的植物在繼代培養中通常會產生不定根.可以直接將生根苗移出進行馴化培養。或者將未生根的試管苗長到3~ 4cm長時切下來,直接栽到蛭石為基質苗床中進行瓶外生根，效果也非常好,省時省工,降低成本。這個階段可篩選淘汰生長不良和感病的試管苗。

⑧ 細胞培養的實驗報告

實驗：細胞培養

1.實驗目的

初步掌握哺乳動物細胞的原代培養與傳代培養的基本操作過程，為生物工程在醫學上的應用打下基礎。

2.實驗原理

從生物體中取出某種組織或細胞，模擬體內生理條件，在人工培養條件下使其生存、生長、繁殖或傳代，這一過程稱為細胞培養。細胞培養技術的最大優點是使我們得以直接觀察活細胞，並在有控制的環境條件下進行實驗，避免了體內實驗時的許多復雜因素，還可以與體內實驗互為補充，可同時提供大量生物性狀相同的細胞作為研究對象，耗費少，比較經濟，因此成為生物學研究的重要手段。近年來，在體細胞遺傳、分化、胚胎發生、腫瘤發生、免疫學、細胞工程、放射生物學以及老年學等一系列的研究領域中得到廣泛的應用，並取得了豐碩的成果。

細胞培養可分為原代培養和傳代(繼代)培養。直接從體內獲取的組織細胞進行首次培養為原代培養；當原代培養的細胞增殖達到一定密度後，則需要做再培養，即將培養的細胞分散後，從一個容器以1：2或其他比率轉移到另一個或幾個容器中擴大培養，為傳代培養，傳代培養的累積次數就是細胞的代數。

細胞培養是一種程序復雜、要求條件多而嚴格的實驗性工作。所有離體細胞的生長都受溫度、滲透壓、pH值、無機鹽影響，消毒、配液等均有嚴格的規范和要求，特別是無菌操作是細胞培養成敗的關鍵。

3.實驗用品

3.1 材料和標本 乳兔、HeLa細胞(人宮頸癌細胞)

3.2 器材和儀器 手術器械、平皿、培養瓶、吸管、離心管(滅菌後備用)、酒精燈、燒杯、超凈工作台、二氧化碳培養箱、倒置顯微鏡。

2.3 試劑 含有5％小牛血清的MEM培養液、0.01mol／L PBS，0.25％胰蛋白酶一0.02％EDTA混合消化液、75％乙醇。

4.實驗方法

4.1 原代細胞培養

4.1.1 原理

細胞培養(Cell culture)是模擬機體內生理條件，將細胞從機體中取出，在人工條件下使其生存、生長、繁殖和傳代，進行細胞生命過程、細胞癌變、細胞工程等問題的研究。近年來，廣泛地應用於分子生物學、遺傳學、免疫學、腫瘤學、細胞工程等領域，發展成一種重要生物技術，並取得顯著成就。由體內直接取出組織或細胞進行培養叫原代培養。原代培養細胞離體時間短，性狀與體內相似，適用於研究。一般說來，幼稚狀態的組織和細胞，如：動物的胚胎、幼仔的臟器等更容易進行原代培養。

4.1.2 操作

①．取材

用頸椎脫位法使乳兔迅速死亡。然後，把整個動物浸入盛有75％乙醇的燒杯中數秒鍾消毒，取出後放在大平皿中攜入超凈台。用消過毒的剪刀剪開用碘酒和乙醇再次消毒後的皮膚，剖腹取出肝臟或腎臟。置於無菌平皿中。

②．切割

用滅菌的PBS液將取出的臟器清洗三次，然後用眼科手術剪刀仔細將組織反復剪碎，直到成1mm3左右的小塊，再用PBS清洗，洗到組織塊發白為止。移入無菌離心管中，靜置數分鍾，使組織塊自然沉澱到管底，棄去上清。

③．消化、接種培養

吸取0.25％胰蛋白酶一0.02％EDTA混合消化液1ml，加入離心管中，與組織塊混勻後，加上管口塞子，37℃水浴中消化8～10分鍾，每隔幾分鍾搖動一下試管，使組織與消化液充分接觸，靜止，吸去上清，向離心管中加入5～10ml含5％小牛血清的MEM培養基，用吸管吹打混勻，移入二個培養瓶中，置於二氧化碳培養箱中培養。

4.1.3 結果

細胞接種後一般幾小時內就能貼壁，並開始生長，如接種的細胞密度適宜，5天到一周即可形成單層。

4.2 傳代細胞培養

4.2.1 原理

體外培養的原代細胞或細胞株要在體外持續地培養就必須傳代，以便獲得穩定的細胞株或得到大量的同種細胞，並維持細胞種的延續。培養的細胞形成單層匯合以後，由於密度過大生存空間不足而引起營養枯竭，將培養的細胞分散，從容器中取出，以1:2或l:3以上的比率轉移到另外的容器中進行培養，即為傳代培養。

細胞「一代」指從細胞接種到分離再培養的一段期間，與細胞世代或倍增不同。在一代中，細胞培增3～6次。細胞傳代後，一般經過三個階段：游離期、指數增生期和停止期。

常用細胞分裂指數表示細胞增殖的旺盛程度，即細胞群的分裂相數／100個細胞。一般細胞分裂指數介於0.2％～0.5％，腫瘤細胞可達3～5％。細胞接種2～3天分裂增殖旺盛，是活力最好時期，稱指數增生期(對數生長期)，適宜進行各種試驗。

4.2.2 操作

①．將長成單層的原代培養細胞或HeLa細胞從二氧化碳培養箱中取出，在超凈工作台中倒掉瓶內的培養液，加入少許消化液。(以液面蓋住細胞為宜)，靜置5～10分鍾。

②.在倒置鏡下觀察被消化的細胞，如果細胞變園，相互之間不再連接成片，這時應立即

在超凈台中將消化液倒掉，加入3～5ml新鮮培養液，吹打，製成細胞懸液。

③．將細胞懸液吸出2ml左右，加到另一個培養瓶中並向每個瓶中分別加3ml左右培養液，蓋好瓶塞，送回二氧化碳培養箱中，繼續進行培養。

4.2.3 結果

一般情況，傳代後的細胞在2小時左右就能附著在培養瓶壁上，2～4天就可在瓶內形成單層，需要再次進行傳代。

4.3 器材及液體的准備和無菌操作的注意事項

4.3.1 器材和液體的准備

細胞培養用的玻璃器材，如：培養瓶、吸管等在清洗干凈以後，裝在鋁盒和鐵筒中，120℃，2小時干烤滅菌後備用；手術器材、瓶塞、配製好的PBS液用滅菌鍋15磅，20分鍾蒸氣滅菌；MEM培養液、小牛血清、消化液用G6濾器負壓抽濾後備用。

4.3.2 無菌操作中的注意事項

在無菌操作中，一定要保持工作區的無菌清潔。為此，在操作前要認真地洗手並用75％乙醇消毒。操作前20～30分鍾起動超凈台吹風。操作時，嚴禁說話，嚴禁用手直接拿無菌的物品，如瓶塞等，而要用器械，如止血鉗、鑷子等去拿。培養瓶要在超凈台內才能打開瓶塞，打開之前用乙醇將瓶口消毒，打開後和加塞前瓶口都要在酒精燈上燒一下，打開瓶口後的操作全部都要在超凈台內完成。操作完畢後，加上瓶塞，才能拿到超凈台外。使用的吸管在從消毒的鐵筒中取出後要手拿末端，將尖端在火上燒一下，戴上膠皮乳頭，然後再去吸取液體。總之，在整個無菌操作過程中都應該在酒精燈的周圍進行。

5．實驗報告

(1).原代細胞和傳代細胞培養有哪些區別?

(2).總結一下你自己的經驗，怎樣才能既迅速，又保證無菌操作。

⑨ 關於繼代培養的一些知識。

將培養細胞從培養器中取出，把一部分移至新的培養器中再進行培養，這種培養方式稱為傳代培養，亦稱為繼代培養或連續培養。 當原代培養成功以後，隨著培養時間的延長和細胞不斷分裂，一則細胞之間相互接觸而發生接觸性抑制，生長速度減慢甚至停止；另一方面也會因營養物不足和代謝物積累而不利於生長或發生中毒。此時就需要將培養物分割成小的部分，重新接種到另外的培養器皿（瓶）內，再進行培養。這個過程就稱為傳代（passage）或者再培養（subculture）。對單層培養而言，80%匯合或剛匯合的細胞是較理想的傳代階段。

⑩ 石斛蘭怎麼進行組織培養繁殖

主要用莖尖培養選取健壯充實的新芽，在無菌條件下剝取頂芽為外植體，進行液體振盪培養，當外植體產生的原球莖有一定數量後即可轉移到固體培養基上培養