❶ 請問如何用sevage法(即用氯仿-正丁醇5:1)除掉多糖中的蛋白
我查的資料都是4:1的,具體方法:在多糖溶液中加入體積4:1的氯仿-正丁醇混合溶液進行充分振搖,將游離蛋白質變性成為不溶性物質而沉澱,經離心或分液去除蛋白質,此方法條件溫和,但需要反復多次才能除去盡可能多的蛋白質
❷ servage去除蛋白質原理 為什麼正丁醇和氯仿的比率為1:4或1;5,還有這個實驗的原理.
savage法提取多糖:
根據蛋白質在氯仿等有機溶劑變性而不溶與水的特點,將多糖水溶液、氯仿、戊醇(或正丁醇)之比調為25:5:1或25:4:1,混合物劇烈振搖20到30分鍾,蛋白質與氯仿-戊醇(或正丁醇)生成凝膠物而分離,然後離心,分去水層和溶劑層交界處的變性蛋白質.
此種方法較溫和,在避免降解上有較好效果,但效率不高,如五味子多糖的提取實驗中要重復處理達三十幾次.並且每次除去蛋白質變性膠狀物時,不可避免的溶有少量多糖,另外少量多糖與蛋白質結合的蛋白聚糖和糖蛋白,在處理時會沉澱下來,造成多糖的損失.如能配合加入一些蛋白質水解酶,再用Sevage法效果更佳.
❸ Sevag試劑怎麼除蛋白
常用的去除多糖中蛋白質的方法有:Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯醋酸法,這些方法的原理是使多糖不沉澱而使蛋白質沉澱,其中Sevag方法脫蛋白效果較好,它是用氯仿:戊醇或丁醇,以4:1比例混合,加到樣品中振搖,使樣品中的蛋白質變性成不溶狀態,用離心法除去。
❹ sevage法脫蛋白的具體步驟
正丁醇、氯仿混合溶液(正丁醇:氯仿=1:4或1:5)和樣物提取液混合並且振盪,不需要加熱
利用離心機離心,直到離液面交界處無白色混懸,也就是蛋白質介於提取液與試劑交界處即可~
最後分別提取即可
❺ sevag法脫蛋白,具體的什麼方法
常用的去除多糖中蛋白質的方法有:Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯醋酸法,這些方法的原理是使多糖不沉澱而使蛋白質沉澱,其中Sevag方法脫蛋白效果較好,它是用氯仿:戊醇或丁醇,以4:1比例混合,加到樣品中振搖,使樣品中的蛋白質變性成不溶狀態,用離心法除去。
Sevage 法:利用蛋白質在三氯乙烷等有機溶劑中變性的特點,將提取液與 Sevage試劑[氯仿:正丁醇=5:1(V/V)]5:1 混合,振盪,離心,變性後的蛋白質介於提取液與 Sevage 試劑交界處。此法的優點是條件溫和,不會引起多糖的變性。
三氯醋酸法 於樣品液中加入適量的三氯醋酸,混勻後靜置過夜,離心過濾棄去濾渣,收集濾液,測定糖濃度和蛋白質濃度"
❻ 提純多糖時用Sevage法除蛋白的具體方法急!!!
.....................自己以後要多看資料,這是自己判斷的事情。
這個比例其實都行,沒有絕對的對錯。你就選擇1:4 震盪時間自己決定,應為如果你要拖干凈的話,也可以多次每次時間短啊,這個和時間長次數少效果是一樣的。 離心好!並且告訴你樣品稍微多准備點,如果你的樣品蛋白質含量高,你去蛋白次數過多的話,你的樣品會在反復的轉移中損失很大。
順便帶上手套,口罩,這個東西是蛋白質變性,弄到你手上最多吊點皮(如果你不在乎) 氣味很刺激。化學實驗都是和毒品打交道,盡量注意安全衛生。
❼ sevage法除蛋白需要的試劑儀器和步驟
Sevage 法:利用蛋白質在三氯乙烷等有機溶劑中變性的特點,將提取液與 Sevage試劑[氯仿:正丁醇=5:1(V/V)]5:1 混合,振盪,離心,變性後的蛋白質介於提取液與 Sevage 試劑交界處。此法的優點是條件溫和,不會引起多糖的變性。
儀器主要就是離心管、離心機之類的了,試劑就氯仿、正丁醇。
❽ sevag法具體是什麼樣的啊
加入0.2倍多糖溶液體積的氯仿和0.04倍體積的正丁醇混合振盪半小時進行分離,直至氯仿與水的界面無沉澱為止,且要重復處理2-3次才能有效除去多糖中的蛋白質。
一般都有市售的試劑盒,也不貴,效果比自己配試劑強很多